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多評法測定異毛蕊花糖苷和異澤蘭黃素的含量

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-08-14 10:50【

鼠曲草為菊科植物鼠曲草 Gnaphlium affine D. Don 的全草,具有祛痰、止咳、平喘、祛風濕等功 效,主要活性成分有黃酮類、二萜類、有機酸類 等,鼠曲草有降血壓、降尿酸等藥理作用,且藥食 兩用,具有較大的研究價值和開發(fā)潛力。鼠曲草的 多成分、多功效的作用特點,單一成分難以反應其 內在質量。因此,應選擇多成分、多指標的測定方 法,對與其功效相關的化學成分進行全面綜合的評 價。2006 年,王智民提出了一種新的評價中藥內在 質 量 模 式 , 即 一 測 多 評 法(quantitative analysis of multi-components by single marker,QAMS)。QAMS 以樣品中某一成分為內參物,建立該成分與其他成 分間的相對校正因子,通過相對校正因子計算其他 成分的含量。該方法具有快速、簡便并能同時實現(xiàn) 多成分同步測定等優(yōu)點。本實驗采用 QAMS 技 術,以綠原酸為內參物,測定鼠曲草中的咖啡酸、 異毛蕊花糖苷和異澤蘭黃素的相對校正因子,建立 鼠曲草藥材的 QAMS 方法,以期為鼠曲草質量控制 提供新的評價模式。



1 儀器與材料

1.1 儀器


Shimadzu LC-2010AHT 高效液相色譜系統(tǒng) (日本島津公司);Agilent 1220 液相色譜儀系統(tǒng)(美 國安捷倫公司);色譜柱:Agilent HC-C18(4.6 mm × 250 mm,5 μm),UItisiITMAQ-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm),Inertsil ODS-3(4.6 mm× 250 mm,5 μm); BS210S 萬分之一分析天平(德國 Sartorious 公司); KQ-250D 型數(shù)控超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。



1.2 試劑和材料

鼠曲草采集于漢中連城山及購買于江西、福建、云南,經西安醫(yī)學院張寒副教授鑒定 為菊科鼠曲草屬鼠曲草 Gnaphlium affine D. Don 的全 草;綠原酸(成都艾科達化學試劑有限公司,批號: MUST-12031401,純度≥98%);咖啡酸(西安開來生 物工程有限公司;批號:K120711,純度≥98%);異 毛蕊花糖苷和異澤蘭黃素(成都埃法生物科技有限公 司,批號:AF8032807,AF7112223,純度≥98%)。 乙腈、甲醇均為色譜純;其余試劑均為分析純。水 為娃哈哈飲用純凈水。



2 方法與結果

2.1 色譜條件


色譜柱:Agilent HC -C18(4.6 mm × 250 mm,5 μm);檢測波長 360 nm;柱溫 27 ℃;體 積流量 1 mL·min- 1 ,進樣量 10 μL;流動相為乙腈 (A)-0.2%磷酸水(B),梯度洗脫(0~8 min,6%~ 15% A; 8~30 min, 15% ~20% A; 30~33 min, 20%~30% A;33~60 min,30%~40% A)。在上述 色譜條件下,各組分分離度良好,樣品和標準品色 。



2.2 方法學考察

2.2.1 混合對照品溶液的制備


分別取綠原酸、異毛 蕊花糖苷和異澤蘭黃素對照品 5 mg,咖啡酸對照品 10 mg,精密稱定,分別置于 10 mL 容量瓶中,加甲 醇溶解,定容至刻度,配制成質量濃度為綠原酸 0.52 mg·L- 1 、咖啡酸 1.06 mg·L- 1 、異毛蕊花糖苷 0.53 mg·L-1 和異澤蘭黃素 0.50 mg·L-1 。分別精密量 取 1 mL 上述各對照品溶液置于 10 mL 容量瓶,加甲醇 定容至刻度,配制成質量濃度為綠原酸 0.052 mg·L-1 、 咖啡酸 0.106 mg·L-1 、異毛蕊花糖苷 0.053 mg·L-1 和異澤蘭黃素 0.050 mg·L-1 的混合對照品溶液。



2.2.2 供試品溶液的制備

鼠曲草藥材干燥粉碎后取 粉末 0.1 g,精密稱定,置 25 mL 容量瓶中,加入 20 mL 的甲醇超聲處理 15 min 后,取出放涼后定容 至刻度,取上清液過 0.45 μm 濾膜,即得。 2.2.3 線性關系考察 精密吸取上述混合對照品溶液 0.4、1、2、3、4 mL 分別放置在 10 mL 的容量瓶 中,用甲醇定容后分別進樣,以進樣量對峰面積積 分值進行回歸處理,得到綠原酸、咖啡酸、異毛蕊 花糖苷和異澤蘭黃素的標準曲線。




3 討論


鼠曲草含黃酮類、二萜類、有機酸類等活性成 分,其中綠原酸具有抗氧化、抗菌、抗癌、降血 脂、降血糖等藥理作用;咖啡酸具有抗氧化、升血 小板、抗血小板凝集、抗氧化、抗腫瘤和腦保護作 用[6] ;異毛蕊花糖苷有抗氧化、抗溶血、抑制血管緊 張素轉化酶及抗高血壓的活性 ;異澤蘭黃素有抗胃 腫瘤、抗氧化的作用。因此本研究選擇這 4 種化合 物作為鼠曲草質量評價的指標。綠原酸在鼠曲草中 化學性質相對穩(wěn)定且含量相對較高,對照品價廉易 得,其提取分離純化工藝相對成熟,故選用其做為 內參物。本研究分別考察了不同的色譜柱及色譜儀 對相對校正因子、相對保留時間的影響,實驗結果 表明,咖啡酸、異毛蕊花糖苷、異澤蘭黃素的相對 校正因子的重現(xiàn)性較好。同時采用外標法測定了鼠 曲草中咖啡酸、異毛蕊花糖苷、異澤蘭黃素的含 量,比較外標法和一測多評法所得含量的結果,發(fā) 現(xiàn)兩種方法得出的結果無顯著性差異。說明本實驗 計算得到的相對校正因子可以作為一個穩(wěn)定的參數(shù) 運用于鼠曲草各成分的含量計算。





 

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