如意金黃散為中藥復(fù)方制劑，外觀為黃色至金 黃色的粉末，氣微香，味苦、微甘。由大黃、白芷、黃 柏、天花粉等多味藥組成，具有活血散瘀、消腫止 痛、抗炎滅菌之功效，可用于治療靜脈炎、兒童腮腺 炎、下肢丹毒等癥，對(duì)糖尿病的并發(fā)癥、肛腸性疾病的治療亦有積極意義。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

LA-20AT 型高效液相色譜儀（日本島津公司）； FA1604N 型電子天平 （南京信展科技有限公司）； 昆山舒美KQ2200E 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公 司）；TU-1810 型紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通 用儀器有限責(zé)任公司）；DHG-9140A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。 歐前胡素 （中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào) 110826-201616）；乙腈、甲醇（色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化 學(xué)試劑有限公司）；二次蒸餾水；如意金黃散（江蘇 707 天然制藥有限公司）。

1.2 色譜條件

色譜柱：InertSustain C18（150mm×4.6mm，5μm）； 流動(dòng)相：乙腈-水（48∶52，體積比）；流速：1.0mL·min-1 ； 檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μL；光譜 掃描范圍 220~500nm。理論塔板數(shù)按歐前胡素標(biāo)準(zhǔn) 品計(jì)算不低于 7700。

1.3 測(cè)定方法

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取經(jīng) P2O5 減壓 干燥后的歐前胡素對(duì)照品 11.1mg，置于 100mL 的 棕色容量瓶中，加甲醇使之溶解，并定容至刻度，搖 勻，配得質(zhì)量濃度為 111μg·mL-1 的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

1.3.2 供試品溶液的制備

取如意金黃散約 1g，精 密稱定，加入甲醇 50mL，稱重，室溫下超聲處理 30min，取出放冷，甲醇補(bǔ)足至原質(zhì)量，過濾，棄去初 濾液，剩余濾液再經(jīng) 0.45μm 微孔濾膜濾過，制得供 試品溶液備用。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)

取對(duì)照品溶液適量，在 220～ 500nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)對(duì)照品溶液在 301nm 和 254nm 處有兩個(gè)吸收峰。根據(jù)色譜圖顯 示，采用 254nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)，基線更穩(wěn)定，干擾 少，分離度好，且有較高的峰面積和峰高值，故選擇 254nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2 流動(dòng)相及流速選擇

實(shí)驗(yàn)考察了 4 種流動(dòng) 相系統(tǒng)即甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.3% H3PO4 溶液 以及甲醇-0.3% H3PO4 溶液，對(duì) HPLC 分離效果的 影響。結(jié)果表明，選用乙腈-水（48∶52，體積比）為流 動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫，所得色譜峰峰形良好，理論塔 板數(shù)較高。中藥制劑如意金黃散的藥味較多，成分復(fù)雜，因而吸收峰較多，選用 301nm 作為特征吸收 峰，發(fā)現(xiàn)有其它物質(zhì)的干擾，故選擇 254nm 作為檢 測(cè)波長(zhǎng)。流速的快慢選擇對(duì)峰形及分析結(jié)果有一定 影響，選擇低流速時(shí)色譜峰的分離效果好，但會(huì)導(dǎo)致 目標(biāo)物出峰時(shí)間延長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)通過對(duì) （0.8、1.0、1.2mL· min- ）1 流動(dòng)相流速的考察，確定最終流速為 1.0mL· min-1 。

2.1.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

取配制好的歐前胡素對(duì)照品 溶液和供試品溶液，按 1.2 色譜條件進(jìn)樣分析，記錄 圖譜。對(duì)照品圖譜見圖 1，供試品圖譜見圖 2。由圖譜分析可知，供試品和對(duì)照品中歐前胡素 吸收峰的保留時(shí)間相同，且實(shí)驗(yàn)條件下歐前胡素與 其它組分分離完全。

2.2 線性關(guān)系考察

取 6 支 25mL 的容量瓶，分別精密移入對(duì)照品 儲(chǔ)備液 0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，用甲醇稀釋并 定容至刻度。按 1.2 色譜分析條件進(jìn)樣，以歐前胡素 的質(zhì)量濃度 C（μg·mL-1 )為橫坐標(biāo)，峰面積 Y 為縱坐 標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖 3。經(jīng)線性擬合，得回歸方程 為 Y=96089C+3509.5，r=1，表明歐前胡素的進(jìn)樣量 在 2.22~22.2μg·mL-1 濃度范圍內(nèi)具有良好的線性 關(guān)系。


3 結(jié)論

樣品經(jīng)甲醇提取，通過對(duì)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化， 建立了高效液相色譜法測(cè)定中藥制劑如意金黃散 中歐前胡素含量的色譜檢測(cè)方法。該方法簡(jiǎn)便、可 靠、重復(fù)性及穩(wěn)定性好，分離效果與專屬性較強(qiáng)，能 為如意金黃散制劑的質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。



 

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